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技術(shù)文章

Elisa試劑盒如何正確洗滌?點(diǎn)擊次數(shù):1270 更新時(shí)間:2021-03-27

  Elisa試劑盒為雙抗體夾心法檢測(cè)抗原RBD蛋白,酶標(biāo)板采用高親和力抗RBD蛋白抗體作為包被物,檢測(cè)時(shí)酶標(biāo)板孔加入待檢樣品或標(biāo)準(zhǔn)品(哺乳動(dòng)物重組表達(dá)RBD蛋白),再加入生物素化抗RBD蛋白抗體,反應(yīng)后加入鏈霉親和素HRP,較后加入單組份TMB底物液。 如果待檢樣品中含有RBD蛋白,TMB底物液在HRP催化下顯色,加入終止液終止顯色后,在酶標(biāo)儀OD450/OD630讀取吸光值,吸光值大小與待檢測(cè)樣品中RBD蛋白濃度呈正相關(guān),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度/吸光值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線,可計(jì)算出待檢樣品中RBD蛋白含量。
 
  Elisa試劑盒的樣品收集:
 
  1.血清:全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。
 
  2.血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè)。避免使用溶血,高血脂樣品。
 
  3.組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。較后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。
 
  4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測(cè)。
 
  5.其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè)。
 
  6.樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。
 
  7.樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),避免反復(fù)凍融。
 
  8.如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品較高值,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù))。
 
  Elisa試劑盒的洗滌方法:
 
  1.自動(dòng)洗板機(jī):每孔加入洗滌液350μL,注入與吸出間隔60秒。
 
  2.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μL,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。
電話:
13788993509
13788995069
021-64133189
傳真:
021-64129208
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