地高辛試劑盒/Roche地高辛標記試劑盒 的選擇
DIG標記及檢測試劑盒 | |||
DIG(地高辛)DNA標記及檢測試劑盒 | |||
DIG DNA labeling and Detection Kit | |||
原理:用DIG-dUTP為底物,隨機摻入法進行DNA標記,通過酶聯免疫雜交的方法檢測。該試劑盒可以標記25次反應,每次標記的DNA量為10ug-20ug,并可做50張10×10cm膜的雜交和檢測。 應用:非放射性DNA標記及檢測試劑盒以檢測0.1pg的同源DNA,能檢測1ug哺乳動物DNA中的單拷貝基因。跟放射性標記系統比較,此試劑盒能快速得到實驗結果,而且消除了放射性同位素的不安全問題。從DNA標記和雜交能見到檢測結果,整個實驗過程24小時內能完成。這試劑盒的靈敏度與特異性使它適用于所有的雜交技術以替代放射性同位素標記和放射自顯影術。這個標記方法和檢測系統適用于DNA—印跡轉移、菌落雜交、噬斑雜交及原位雜交。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1093657 | Kit | Roche | 查詢 |
DIG DNA 標記試劑盒 | |||
DIG DNA Labeling Kit | |||
用DIG-11-dUTP對DNA作隨機引物擴增法標記。帶DIG標記的探針可用于各種類型膜雜交,標記的探針通過酶聯免疫法檢測。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1175033 | Kit(40個標記反應) | Roche | 查詢 |
DIG 標記試劑 | |||
DIG High Prime | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1585606 | 160μ1(40個標記反應) | Roche | 查詢 |
附:(原位雜交技術能夠在細胞或組織內的實際位置顯現基因及其表達產物,所以此技術已成為一種十分重要的研究工具。DIG系統能廣泛應用于原位雜交技術,取代同位素方法。 | |||
DIGDNA標記及檢測Starter Kit 1 | |||
DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit 1 | |||
Roche公司現為用戶提供一種新的DIG標記及檢測試盒DIG High Prime DNA Labeling and Detection Kit I。與原有的DIG DNA Labeling and Detection kit(Cat.093657)比較,本產品有以下特點:
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產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1745832 | Kit | Roche | 查詢 |
DIGDNA標記及檢測Starter Kit∏ | |||
DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit∏ | |||
對于需要使用化學發光法檢測的用戶,我公司現提供了此新的DIG標記及檢測試劑盒。 與上述的StarterKit I不同,此新的StarterKit ∏所含的底物為CSPD,但它同樣有以下特點:
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產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1585614 | Kit | Roche | 查詢 |
DIG發光檢測試劑盒(可做50張10×10cm膜檢測反應) | |||
DIG Luminescent Detection Kit(for nucleic acids) | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1363514 | Kit | Roche | 查詢 |
DIG核酸檢測試劑盒 | |||
DIG Nucleic Acid Detection Kit | |||
用DIG標記的核酸作探針,按常規方法進行雜交。可做40張膜檢測反應。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1175041 | Kit | Roche | 查詢 |
DIG系統是您理想的核酸標記及檢測工具 | |||
經過近十年的開發和*化,DIG系統現已成為產品zui齊備,在國內外zui被接受和zui常被文獻引述的非放射性系統,其優點包括: | |||
DIG寡核苷酸5′末端標記試劑盒 | |||
DIG Oligonucleotide 5′-End Labeling Set | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1480863 | Set (10個標記反應) | Roche | 查詢 |
PCR DIG 探針合成試劑盒 | |||
PCR DIG Probe Synthesis Kit | |||
標記的探針可在Southem雜交后從5-10ug的人基因級別DNA檢測出單拷貝基因,是從少量DNA模板制備大量探針的zui有效、的方法。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1636090 | Kit(25個標記反應) | Roche | 查詢 |
DIG RNA標記試劑盒 | |||
DIG RNA Labeling Kit(SP6/T7) | |||
RNA是由SP6或T7RNA聚合酶催化的體外轉錄反應里被標記的。在轉錄反應過程中,核苷酸類似物Digoxigenin-11-UTP(DIG-UTP)是被利用來替代UTP(或其它放射性標記了的核苷酸)的角色。在新合成的RNA中,約每25個堿基便摻入了DIG-UTP。可標記轉錄反應2×10標記反應后,DIG-標記RNA可用于各種雜交技術,包括: | |||
●Northern印跡 ●Southern印跡 ●Dot/Slot印跡 | |||
●菌落篩選 ●噬菌斑雜交 ●原位雜交 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1175025 | Kit | Roche | 查詢 |
附 DIG 系統在膜雜交中的應用:點雜交、常規Southern雜交、使用RNA探針Northern雜交。如需相關資料說明書,查詢! | |||
DIG標記反應試劑 | |||
抗地高辛(DIG)堿性磷酸酶復合物Anti-DIG-AP | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1093274 | 150u(200ul) | Roche | 查詢 |
CSPD化學發光底物 | |||
CSPD Chemiluminescence Substrate | |||
●背景低,15分鐘曝光即可獲得清晰的結果。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1655884 | 1ml | Roche | 查詢 |
CDP-StarTM化學發光底物CDP-StarTM Chemiluminescence Substrate ●是目前zui快速、zui靈敏的化學發光底物,曝光時間只需15-60秒。 ●是以下操作的理想底物: ●檢測哺乳動物的單拷貝基因。 ●在Northern雜交以RNA探針檢測稀有的mRNA。 ●檢測極少量的靶DNA,如制作指紋圖譜及法醫分析。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1685627 | 1ml | Roche | 查詢 |
DIG對照試紙條 DIG Control Teststrips ●DIG對照和定量試紙條(Cat.669958)能方便估計DIG標記探針的濃度,以取得理想的信嗓比。 ●省時:能在30分鐘內測定DIG標記DNA或RNA的濃度。 ●令您在估計探針產量時,可節省大量試劑。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1669966 | 25條 | Roche | 查詢 |
DIG DNA標記混合物 | |||
DIG DNA Labeling Mix | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1277065 | 50ul(25個反應) | Roche | 查詢 |
DIG 簡便雜交液 DIG Easy-Hyb ●預混、無毒(不含甲酰胺)、即開即用的雜交液。 ●省時:能大量減少雜交時間,令您可在一天內完成常規的Southern Blot或文庫篩選。 ●使用方便:只要將DIG標記探針加進DIG Easy-Hyb.無需再進行任何*化處理。 ●適用范圍廣:適用于DIG系統的各種膜雜交,可采用多種不同的溫度及任何類型的探針(但在原位雜交的效果有待驗證)。 ●雜交效果好,背景低,更適宜做多次雜交。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1603558 | 500ml | Roche | 查詢 |
DIG 清洗及阻斷緩沖液組合 DIG Wash and Block Buffer Set ●是適用清洗、阻斷及檢測的濃縮液。 ●使用前稀釋即可,即使阻斷試劑亦是預制的。 ●經過消毒及檢測,確保不含DNase,RNase及污染物 ●包含以馬來酸為基礎的緩沖液,以降低Northern Blot的背景,亦能改善其它應作用中的檢測結果。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1585762 | 1set(30 blots) | Roche | 查詢 |
阻斷試劑 | |||
Blocking Reagent | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1096176 | 50g | Roche | 查詢 |
DIG標記的UTP | |||
DIG-11-UTP | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1209256 | 250nmol(25μl) | Roche | 查詢 |
DIG標記的dUTP | |||
DIG-11-dUTP | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1093088 | 25nmol(25μl) | Roche | 查詢 |
DIG標記的ddUTP | |||
DIG-11-ddUTP | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1363905 | 25nmol(25μl) | Roche | 查詢 |
尼龍雜交轉印膜,帶正電荷 Nylon Membranes, Positively Charged 因其帶正電荷,能緊密結合DNA而使背景降至zui低,且能迅速轉移和結合DNA,較高機械強度的膜能進行多次探針剝離及重雜交。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1209299 | 20張(10×15cm) | Roche | 查詢` |
1417240 | 1卷(30cm×3m) | Roche | 查詢 |
1699075 | 50張(82mm直徑圓片) | Roche | 查詢 |
1699083 | 50張(132mm直徑圓片) | Roche | 查詢 |
配合原位雜交技術發展的先進DIG產品 | |||
原位雜交技術的發展迅速,亦不斷推出新的產品配合新的研究方向,除了各種不同的抗體復合物外,還提供以下產品: | |||
DNA探針,人染色體特異 | |||
羅氏(原寶靈曼)現供應多種不同的人染色體特異DIG標記探針,方便您進行熒光原位雜交(FISH)。羅氏公司的探針為包含人衛星DNA的質粒,在嚴格的條件下,每個探針只在原位與目的染色體的著絲粒雜交。除了供應DIG探針,方便以抗DIG-熒光色素作較靈敏的間接檢測外,還提供熒光素標記的探針作直接檢測。這些探針可用于: | |||
●鑒別在中期散開物或新間期核階段的個別染色體 | |||
●鑒別非整倍體細胞,雜交細胞腫瘤 | |||
●染色體作圖研究 | |||
PRINS反應組合: | |||
PRINS(Primed in Site Labeling)可替代傳統的原位雜交方法,只須幾個步驟便能快速鑒別人染色體。羅氏公司的PRINS反應組合,結合PRINS與DIG技術,令您能準確地在原位對特異人染色體定位。人染色體首先被變性,與無標記的序列特異寡核苷酸退火,利用此退火的寡核苷酸作引物,可進行DIG-dUTP的標記反應,之后便可對DIG標記作檢測。PRINS反應組合的特點包括: | |||
●靈活:提供個別的特異引物配合您的需要,而且可方便dTTP的濃度,提高靈敏度,更可與標準的原位雜交技術結合,取得更多資料 | |||
●使用方便 | |||
●可靠:經過應用于人染色體的測試,確保能取得可靠的結果 | |||
操作DIG的系統的技術提示 | |||
DIG系統具有安全、方便、快捷、靈活、靈敏度高等優點,而且DIG系統所涉及的操作步驟基本上與同位素方法法同,用戶要取得理想的實驗結果并不困難,但有一些事項必須特別注意,以下列出了一些技術提示 [Ⅰ]模板的制備 | |||
-須作CsC1-酚-氯仿-乙醇抽提(或zui低限度作酚-氯仿-乙醇抽提)純化模板。 | |||
-插入子沒有載體序列,以避免交叉雜交。 | |||
-玻璃奶方法純化得到的核酸,須在經過酚-氯仿-乙醇的抽提后,才可用于標記(High prime)。 | |||
[Ⅱ]標記 | |||
-在使用隨機引物標記法時,須留意變性步驟要在水浴中進行,并須立刻冷卻。 | |||
-在每次標記后都必須檢測標記效率(可用產品DIG定量試紙條Cat.669958和對照試紙條1669966)。 | |||
-如在標記前模板未經前述步驟純化,在雜交前建議對探針進行純化。可利用蛋白酶K作處理,并在變性及加入預先加溫的DIG簡便雜交液(不可用含封阻試劑的緩沖液)之后以0.45um醋酸纖維素濾膜過濾。 | |||
[Ⅲ]印跡 | |||
-應盡量采用羅氏的帶正電雜交膜,以降低背景和得到*的信噪比。 | |||
-處理雜交膜時必須特別小心,并須使用無粉末手套。 | |||
-應根據不同的核酸種類,采用合適的轉移條件。 | |||
[Ⅳ]雜交 | |||
-須根據GC含量及同源性計算應采用的雜交溫度。 | |||
-在預雜交及zui后清洗之間的所有時間,雜交膜均應保持濕潤。 | |||
-可使用雜交袋或烘箱,但不可使用無蓋的盤。 | |||
-在封閉雜交袋前,必須將雜交液中的氣泡清除。 | |||
-切勿使用過量的探針,以避免過高的背景。一般DNA探針濃度為25ng/ml,RNA探針則為100ng/ml,如使用CDP-Star作底物,探針濃度應減低一半或以上。 | |||
-應盡量采用DIG簡便雜交液。 | |||
-如作Northern印跡: | |||
●須使用十分嚴格的條件。 | |||
●特別建議采用DIG簡便雜交液。 | |||
●應盡量使用RNA探針,因為用DNA探針產生的訊號弱50-100倍。 | |||
[Ⅴ]檢測 | |||
-在使用Anti-DIG-AP前,應在微離心機以10000rpm離心5分鐘,然后在表面抽取該抗體使用。 | |||
-如要保存經稀釋的化學發光底物,應將它消毒過濾,并中入0.1M*。 | |||
-在加入化學發光底物前應避免有過量的Buffer3留在膜上,可使用已消毒的Whatman紙,在120。C烘2小時輕輕將膜稍為弄干或直接讓Buffer3滴出。 |
DIG標記及檢測試劑盒 | |||
DIG(地高辛)DNA標記及檢測試劑盒 | |||
DIG DNA labeling and Detection Kit | |||
原理:用DIG-dUTP為底物,隨機摻入法進行DNA標記,通過酶聯免疫雜交的方法檢測。該試劑盒可以標記25次反應,每次標記的DNA量為10ug-20ug,并可做50張10×10cm膜的雜交和檢測。 應用:非放射性DNA標記及檢測試劑盒以檢測0.1pg的同源DNA,能檢測1ug哺乳動物DNA中的單拷貝基因。跟放射性標記系統比較,此試劑盒能快速得到實驗結果,而且消除了放射性同位素的不安全問題。從DNA標記和雜交能見到檢測結果,整個實驗過程24小時內能完成。這試劑盒的靈敏度與特異性使它適用于所有的雜交技術以替代放射性同位素標記和放射自顯影術。這個標記方法和檢測系統適用于DNA—印跡轉移、菌落雜交、噬斑雜交及原位雜交。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1093657 | Kit | Roche | 查詢 |
DIG DNA 標記試劑盒 | |||
DIG DNA Labeling Kit | |||
用DIG-11-dUTP對DNA作隨機引物擴增法標記。帶DIG標記的探針可用于各種類型膜雜交,標記的探針通過酶聯免疫法檢測。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1175033 | Kit(40個標記反應) | Roche | 查詢 |
DIG 標記試劑 | |||
DIG High Prime | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1585606 | 160μ1(40個標記反應) | Roche | 查詢 |
附:(原位雜交技術能夠在細胞或組織內的實際位置顯現基因及其表達產物,所以此技術已成為一種十分重要的研究工具。DIG系統能廣泛應用于原位雜交技術,取代同位素方法。 | |||
DIGDNA標記及檢測Starter Kit 1 | |||
DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit 1 | |||
Roche公司現為用戶提供一種新的DIG標記及檢測試盒DIG High Prime DNA Labeling and Detection Kit I。與原有的DIG DNA Labeling and Detection kit(Cat.093657)比較,本產品有以下特點:
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產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1745832 | Kit | Roche | 查詢 |
DIGDNA標記及檢測Starter Kit∏ | |||
DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit∏ | |||
對于需要使用化學發光法檢測的用戶,我公司現提供了此新的DIG標記及檢測試劑盒。 與上述的StarterKit I不同,此新的StarterKit ∏所含的底物為CSPD,但它同樣有以下特點:
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產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1585614 | Kit | Roche | 查詢 |
DIG發光檢測試劑盒(可做50張10×10cm膜檢測反應) | |||
DIG Luminescent Detection Kit(for nucleic acids) | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1363514 | Kit | Roche | 查詢 |
DIG核酸檢測試劑盒 | |||
DIG Nucleic Acid Detection Kit | |||
用DIG標記的核酸作探針,按常規方法進行雜交。可做40張膜檢測反應。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1175041 | Kit | Roche | 查詢 |
DIG系統是您理想的核酸標記及檢測工具 | |||
經過近十年的開發和*化,DIG系統現已成為產品zui齊備,在國內外zui被接受和zui常被文獻引述的非放射性系統,其優點包括: | |||
DIG寡核苷酸5′末端標記試劑盒 | |||
DIG Oligonucleotide 5′-End Labeling Set | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1480863 | Set (10個標記反應) | Roche | 查詢 |
PCR DIG 探針合成試劑盒 | |||
PCR DIG Probe Synthesis Kit | |||
標記的探針可在Southem雜交后從5-10ug的人基因級別DNA檢測出單拷貝基因,是從少量DNA模板制備大量探針的zui有效、的方法。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1636090 | Kit(25個標記反應) | Roche | 查詢 |
DIG RNA標記試劑盒 | |||
DIG RNA Labeling Kit(SP6/T7) | |||
RNA是由SP6或T7RNA聚合酶催化的體外轉錄反應里被標記的。在轉錄反應過程中,核苷酸類似物Digoxigenin-11-UTP(DIG-UTP)是被利用來替代UTP(或其它放射性標記了的核苷酸)的角色。在新合成的RNA中,約每25個堿基便摻入了DIG-UTP。可標記轉錄反應2×10標記反應后,DIG-標記RNA可用于各種雜交技術,包括: | |||
●Northern印跡 ●Southern印跡 ●Dot/Slot印跡 | |||
●菌落篩選 ●噬菌斑雜交 ●原位雜交 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1175025 | Kit | Roche | 查詢 |
附 DIG 系統在膜雜交中的應用:點雜交、常規Southern雜交、使用RNA探針Northern雜交。如需相關資料說明書,查詢! | |||
DIG標記反應試劑 | |||
抗地高辛(DIG)堿性磷酸酶復合物Anti-DIG-AP | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1093274 | 150u(200ul) | Roche | 查詢 |
CSPD化學發光底物 | |||
CSPD Chemiluminescence Substrate | |||
●背景低,15分鐘曝光即可獲得清晰的結果。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1655884 | 1ml | Roche | 查詢 |
CDP-StarTM化學發光底物CDP-StarTM Chemiluminescence Substrate ●是目前zui快速、zui靈敏的化學發光底物,曝光時間只需15-60秒。 ●是以下操作的理想底物: ●檢測哺乳動物的單拷貝基因。 ●在Northern雜交以RNA探針檢測稀有的mRNA。 ●檢測極少量的靶DNA,如制作指紋圖譜及法醫分析。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1685627 | 1ml | Roche | 查詢 |
DIG對照試紙條 DIG Control Teststrips ●DIG對照和定量試紙條(Cat.669958)能方便估計DIG標記探針的濃度,以取得理想的信嗓比。 ●省時:能在30分鐘內測定DIG標記DNA或RNA的濃度。 ●令您在估計探針產量時,可節省大量試劑。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1669966 | 25條 | Roche | 查詢 |
DIG DNA標記混合物 | |||
DIG DNA Labeling Mix | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1277065 | 50ul(25個反應) | Roche | 查詢 |
DIG 簡便雜交液 DIG Easy-Hyb ●預混、無毒(不含甲酰胺)、即開即用的雜交液。 ●省時:能大量減少雜交時間,令您可在一天內完成常規的Southern Blot或文庫篩選。 ●使用方便:只要將DIG標記探針加進DIG Easy-Hyb.無需再進行任何*化處理。 ●適用范圍廣:適用于DIG系統的各種膜雜交,可采用多種不同的溫度及任何類型的探針(但在原位雜交的效果有待驗證)。 ●雜交效果好,背景低,更適宜做多次雜交。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1603558 | 500ml | Roche | 查詢 |
DIG 清洗及阻斷緩沖液組合 DIG Wash and Block Buffer Set ●是適用清洗、阻斷及檢測的濃縮液。 ●使用前稀釋即可,即使阻斷試劑亦是預制的。 ●經過消毒及檢測,確保不含DNase,RNase及污染物 ●包含以馬來酸為基礎的緩沖液,以降低Northern Blot的背景,亦能改善其它應作用中的檢測結果。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1585762 | 1set(30 blots) | Roche | 查詢 |
阻斷試劑 | |||
Blocking Reagent | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1096176 | 50g | Roche | 查詢 |
DIG標記的UTP | |||
DIG-11-UTP | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1209256 | 250nmol(25μl) | Roche | 查詢 |
DIG標記的dUTP | |||
DIG-11-dUTP | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1093088 | 25nmol(25μl) | Roche | 查詢 |
DIG標記的ddUTP | |||
DIG-11-ddUTP | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1363905 | 25nmol(25μl) | Roche | 查詢 |
尼龍雜交轉印膜,帶正電荷 Nylon Membranes, Positively Charged 因其帶正電荷,能緊密結合DNA而使背景降至zui低,且能迅速轉移和結合DNA,較高機械強度的膜能進行多次探針剝離及重雜交。 | |||
產品號 | 產品規格 | 廠商 | 價格$ |
1209299 | 20張(10×15cm) | Roche | 查詢` |
1417240 | 1卷(30cm×3m) | Roche | 查詢 |
1699075 | 50張(82mm直徑圓片) | Roche | 查詢 |
1699083 | 50張(132mm直徑圓片) | Roche | 查詢 |
配合原位雜交技術發展的先進DIG產品 | |||
原位雜交技術的發展迅速,亦不斷推出新的產品配合新的研究方向,除了各種不同的抗體復合物外,還提供以下產品: | |||
DNA探針,人染色體特異 | |||
羅氏(原寶靈曼)現供應多種不同的人染色體特異DIG標記探針,方便您進行熒光原位雜交(FISH)。羅氏公司的探針為包含人衛星DNA的質粒,在嚴格的條件下,每個探針只在原位與目的染色體的著絲粒雜交。除了供應DIG探針,方便以抗DIG-熒光色素作較靈敏的間接檢測外,還提供熒光素標記的探針作直接檢測。這些探針可用于: | |||
●鑒別在中期散開物或新間期核階段的個別染色體 | |||
●鑒別非整倍體細胞,雜交細胞腫瘤 | |||
●染色體作圖研究 | |||
PRINS反應組合: | |||
PRINS(Primed in Site Labeling)可替代傳統的原位雜交方法,只須幾個步驟便能快速鑒別人染色體。羅氏公司的PRINS反應組合,結合PRINS與DIG技術,令您能準確地在原位對特異人染色體定位。人染色體首先被變性,與無標記的序列特異寡核苷酸退火,利用此退火的寡核苷酸作引物,可進行DIG-dUTP的標記反應,之后便可對DIG標記作檢測。PRINS反應組合的特點包括: | |||
●靈活:提供個別的特異引物配合您的需要,而且可方便dTTP的濃度,提高靈敏度,更可與標準的原位雜交技術結合,取得更多資料 | |||
●使用方便 | |||
●可靠:經過應用于人染色體的測試,確保能取得可靠的結果 | |||
操作DIG的系統的技術提示 | |||
DIG系統具有安全、方便、快捷、靈活、靈敏度高等優點,而且DIG系統所涉及的操作步驟基本上與同位素方法法同,用戶要取得理想的實驗結果并不困難,但有一些事項必須特別注意,以下列出了一些技術提示 [Ⅰ]模板的制備 | |||
-須作CsC1-酚-氯仿-乙醇抽提(或zui低限度作酚-氯仿-乙醇抽提)純化模板。 | |||
-插入子沒有載體序列,以避免交叉雜交。 | |||
-玻璃奶方法純化得到的核酸,須在經過酚-氯仿-乙醇的抽提后,才可用于標記(High prime)。 | |||
[Ⅱ]標記 | |||
-在使用隨機引物標記法時,須留意變性步驟要在水浴中進行,并須立刻冷卻。 | |||
-在每次標記后都必須檢測標記效率(可用產品DIG定量試紙條Cat.669958和對照試紙條1669966)。 | |||
-如在標記前模板未經前述步驟純化,在雜交前建議對探針進行純化。可利用蛋白酶K作處理,并在變性及加入預先加溫的DIG簡便雜交液(不可用含封阻試劑的緩沖液)之后以0.45um醋酸纖維素濾膜過濾。 | |||
[Ⅲ]印跡 | |||
-應盡量采用羅氏的帶正電雜交膜,以降低背景和得到*的信噪比。 | |||
-處理雜交膜時必須特別小心,并須使用無粉末手套。 | |||
-應根據不同的核酸種類,采用合適的轉移條件。 | |||
[Ⅳ]雜交 | |||
-須根據GC含量及同源性計算應采用的雜交溫度。 | |||
-在預雜交及zui后清洗之間的所有時間,雜交膜均應保持濕潤。 | |||
-可使用雜交袋或烘箱,但不可使用無蓋的盤。 | |||
-在封閉雜交袋前,必須將雜交液中的氣泡清除。 | |||
-切勿使用過量的探針,以避免過高的背景。一般DNA探針濃度為25ng/ml,RNA探針則為100ng/ml,如使用CDP-Star作底物,探針濃度應減低一半或以上。 | |||
-應盡量采用DIG簡便雜交液。 | |||
-如作Northern印跡: | |||
●須使用十分嚴格的條件。 | |||
●特別建議采用DIG簡便雜交液。 | |||
●應盡量使用RNA探針,因為用DNA探針產生的訊號弱50-100倍。 | |||
[Ⅴ]檢測 | |||
-在使用Anti-DIG-AP前,應在微離心機以10000rpm離心5分鐘,然后在表面抽取該抗體使用。 | |||
-如要保存經稀釋的化學發光底物,應將它消毒過濾,并中入0.1M*。 | |||
-在加入化學發光底物前應避免有過量的Buffer3留在膜上,可使用已消毒的Whatman紙,在120。C烘2小時輕輕將膜稍為弄干或直接讓Buffer3滴出。 |